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ITRAQ

 iTRAQ(IsobaricTagforRelativeAbsoluteQuantitation)技术由ABSCIEX公司研发的一种体外等重同位素标记的相对与绝对定量技术。该技术利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量。

技术原理

ITRAQ试剂是一种小分子同重元素化学物质,包括三部分:报告基团、平衡基团和肽反应基团,形成4种或8种相对分子质量均等量(145或305)的异位标签。

将蛋白质裂解为肽段后用ITRAQ试剂进行标记。一级质谱中,任何一种ITRAQ试剂标记的不同样品中的同一肽段表现出相同的质荷比; 二级质谱中,报告基团、质量平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂,质量平衡基团丢失,带不同同位素标签的同一肽段产生质量不同的报告离子, 根据报告离子的丰度可获得样本间相同肽段的定量信息,再经过软件处理得到蛋白质的定量信息。

技术流程
技术优势

1.定量精确:每组平行比较多达8个样本,标记效率高达97%。
2.适用范围广:可用于各种类型生物样本,样品类型包括:胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等。
3.灵敏度高:可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
4.高效:液相色谱与串联质谱连用,自动化操作,分析速度快,分离效果好。

应用领域

生物标志物筛选
药物作用靶点研究
蛋白混合物或重组蛋白混合物精确定量

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